Reconstituer un peptide lyophilisé : calcul de concentration pas à pas
Guide de paillasse pour préparer une solution mère à partir d'un peptide lyophilisé : choix du volume de diluant, calcul de la concentration, dilution de travail et correction par la teneur nette en peptide. Exemples chiffrés pour 5 mg et 10 mg.
Étape 1 : Choisir le volume de diluant
Reconstituer, c'est dissoudre le culot lyophilisé dans un volume connu de diluant (eau stérile ou tampon adapté). Le point clé : le volume choisi fixe la concentration de la solution mère, et donc la facilité des dilutions qui suivent. Une solution mère très concentrée oblige à pipeter de très petits volumes, source d'erreur ; trop diluée, elle limite la concentration maximale atteignable dans l'essai.
Étape 2 : La concentration de la solution mère
Exemple : un flacon de 5 mg repris dans 2 ml donne 5 ÷ 2 = 2,5 mg/ml, soit 2 500 µg/ml. Le même flacon repris dans 1 ml donnerait une solution deux fois plus concentrée, 5 mg/ml.
Étape 3 : La dilution de travail
Les essais se font rarement à la concentration de la solution mère. On prépare une dilution de travail en appliquant la conservation de la matière :
Solution mère à 2 500 µg/ml, 10 ml visés à 50 µg/ml : V1 = 50 × 10 ÷ 2 500 = 0,2 ml, soit 200 µl de solution mère complétés à 10 ml avec 9,8 ml de diluant ou de milieu.
Flacon de 10 mg repris dans 2 ml, soit 5 000 µg/ml ; 1 ml visé à 100 µg/ml : V1 = 100 × 1 ÷ 5 000 = 0,02 ml, soit 20 µl complétés par 980 µl. Sous une dizaine de microlitres, mieux vaut passer par une dilution intermédiaire que de pipeter un volume trop petit pour être précis.
Étape 4 : Corriger par la teneur nette en peptide
La masse indiquée sur le flacon est une masse de poudre. Une partie est constituée d'eau résiduelle et de contre-ions (acétate, TFA) issus de la purification. Le certificat d'analyse indique, quand il la mesure, la teneur nette en peptide : un flacon de 10 mg à 80 % de teneur nette contient 8 mg de peptide, et sa solution mère titre 20 % de moins que le calcul brut. Les travaux qui exigent une concentration exacte en tiennent compte.
Bonnes pratiques
- Verser le diluant lentement le long de la paroi, sans viser la poudre, et ne jamais secouer.
- Répartir la solution mère en aliquotes pour éviter les cycles de congélation et décongélation.
- Étiqueter chaque tube : molécule, concentration, numéro de lot, date de préparation.
- Utiliser des pipettes étalonnées adaptées aux volumes prélevés.
Sources
- Relation de dilution C1 × V1 = C2 × V2 (conservation de la quantité de matière).
- Bonnes pratiques de reconstitution et d'aliquotage des peptides lyophilisés.
